生物类似药的毒理学相似性评价中通常开展重复给药毒性比对试验，而无须开展单次给药急性毒性、安全药理学、生殖发育毒性和致癌性比对试验。

　　生物类似药和创新生物药的重复给药毒性试验的试验方法基本相同，但由于试验目的不同且已知参照药数据，生物类似药的重复给药毒性试验应该与参照药进行比对，同时需特别考虑以下内容。

动物的选择

　　参考参照药数据，选择有药理活性的动物，可用一种动物和单一性别的动物进行候选药与参照药的毒理学相似性评价。

试验药物的选择

　　参照药应尽可能选择来自候选药拟申报的国家和地区的药品。若候选药拟申报多个地区，一般应对多个地区的参照药进行充分的体外药效学和生物活性相似性研究，在这些参照药之间以及与候选药相似的条件下，选择来自一个地区的参照药进行试验。候选药应为生产工艺确定后生产的产品，最好为商业化工艺生产的产品。可选择1个批次的候选药和参照药进行试验。

组别和剂量设计

　　设溶媒对照组、候选药组和参照药组。候选药设1~3个剂量，参照药至少设1个剂量，参照药的剂量应能充分显示药物毒性，但不至于导致动物死亡。

试验周期

　　如果是每天给药的药物或给药间隔周期短的药物，则重复给药4周可满足要求;若是给药间隔时间长的药物，一般是完成4次给药。根据ICH S6(R1)，生物药毒性试验的恢复期主要是观察任何潜在毒性作用的可恢复性而不是药物的迟发毒性。生物类似药的毒性试验目的是比较候选药与参照药毒性的相似性或者异同，这些异同在给药期就足以被发现并能满足生物类似药相似性评价的目的，因此，可不设恢复期。

检测指标

　　常规检测指标有：临床观察、体重、摄食量、眼科检查、心电图/血压、体温、给药局部刺激、血液学、凝血、血生化、尿液分析、大体观察、脏器重量、病理组织学、TK和ADA。根据候选药和参照药的作用机制及参照药已知数据，检测与药理作用相关的其他指标，如免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)、淋巴细胞亚群(B淋巴细胞、CD4+ T淋巴细胞、CD8+ T淋巴细胞、NK细胞等)、补体(C3、C4)和细胞因子(INF-γ、TNF-α、IL-2、IL-6、IL-10)等。也可以考虑不进行动物安乐死以及组织病理学检查。

试验结果分析

　　对于定量指标，应采用合适的统计学方法判断是否具有显著性差异;或直接比较候选药和参照药毒性指标以评价药物相似性。

案例分析

　　Hulio Hulio是Kyowa Kirin公司开发的Humira(adalimumab，阿达木单抗)生物类似药。Humira是抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体，临床上用于治疗类风湿关节炎、幼年特发性关节炎、银屑病关节炎、斑块状银屑病、强直性脊柱炎、化脓性汗腺炎和葡萄膜炎。

　　Kyowa Kirin公司在食蟹猴中比较Hulio和Humira的毒性特征相似性。试验共设3组，分别为溶媒对照组、Hulio和Humira 30mg/kg给药组。皮下注射给药，每周给药1次，共给药4周。评价以下指标：临床观察、体重、摄食量、心电图、眼科检查、临床病理、外周血白细胞、大体解剖和组织病理学。试验结果显示：动物对Hulio和Humira 30mg/kg耐受良好，这与Humir a的重复给药毒性试验结果一致。各项检测均未见显著性的或有生理学意义的药物相关改变。组织病理学检测可见Hulio和Humira给药组动物肠系膜和颌下腺淋巴结与脾脏的滤泡中CD21+细胞减少，此为药物放大的药理作用所致。试验结果表明Hulio与Humira的毒性特性相似。

　　Benepali Benepali是三星生物开发的Enbrel(etanercept，依那西普)生物类似药。Enbrel是TNF-α受体-Fc融合蛋白，临床上用于治疗类风湿关节炎、幼年特发性关节炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎和斑块状银屑病。

　　三星生物在食蟹猴中比较Benepali和Enbrel的毒性特征相似性。试验共设7组，分别为溶媒对照组、Benepali给药组(1mg/kg和15mg/kg)、欧盟和美国来源的Enbr el给药组(1mg/kg和15mg/kg)。皮下注射给药，每周给药2次，共给药4周。检测以下指标：临床观察、体重、摄食量、心电图、眼科检查、临床病理指标、ADA、大体解剖、脏器重量和组织病理学。试验结果显示：动物对Benepali和Enbrel 15mg/kg耐受良好，各项检测和给药局部均未见药物相关的改变。Benepali和Enbrel给药组动物第22天均可见ADA阳性，但高剂量组ADA阳性率低于低剂量组。试验结果表明Benepali和Enbrel的毒性特性相似。

　　(摘编自《生物类似药从研发到使用》，中国医药科技出版社出版)